Purificación y caracterización, a partir de residuos agroindustriales de alcachofa, de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas con aplicaciones biotecnológicas

Abstract

Se ha abordado la purificación y la caracterización cinética de proteasas, peroxidasas y polifenoloxidasas, obtenidas a partir de residuos agroindustriales de alcachofa. El proceso de purificación de enzimas ha abarcado etapas de centrifugación, ultrafiltración y cromatografías de intercambio iónico, interacción hidrofóbica y filtración en gel, considerando su escalado hasta el nivel preparativo de planta piloto. El avance del proceso se ha comprobado mediante (SDS)PAGE e IEF, técnicas que también han permitidola determinación de masas moleculares y los valores de pH isoeléctrico de las isoenzimas purificadas, con satisfactoria recuperación y grado de purificación. A partir de los pistilos de alcachofa, se han obtenido tres aspártico proteasas o Cinarasas A, B y C. La primera es la más abundante y la segunda presenta la mayor actividad específica. Muestran actividad amidolítica e inhibición ante pepstatina, intermedias entre pepsina y quimosina. La actividad coagulante de la leche y la actividad proteolítica sobre caseínas, es similar a la de los cuajos de ternera y microbianos, por lo que pueden tener aplicación en la elaboración de cuajadas y quesos. Las brácteas de alcachofa contienen peroxidasa catiónica en estados penta y hexacoordinados, con distinta proporción de calcio enlazado. Se ha caracterizado la actividad y la estabilidad de esta peroxidasa ante calcio, peróxido de hidrógeno y disolventes orgánicos, optimizando las condiciones de ensayo para sus potenciales aplicaciones biotecnológicas, como análisis clínicos (glucosa, colesterol, inmunoensayos para virus, etc.), degradación de contaminantes fenólicos y síntesis de resinas fenólicas. También a partir de brácteas de alcachofa, se ha purificado tirosinasa o polifenoloxidasa, caracterizando sus actividades monofenolasa y difenolasa. La enzima actúa satisfactoriamente en medio acuoso, orgánico y ante tensoactivos, mostrando est