Caracterización cinética del mecanismo de reacción en las actividades enzimáticas monofenolasa y difenolasa de tirosinasa

Resumen

La caracterización cuantitativa del efecto isotópico del disolvente, sobre las actividades monofenolasa y difenolasa de tirosinasa, ha conducido a establecer las respectivas etapas determinantes de la velocidad, en ambas actividades. En la actividad monofenolasa se ha demostrado la liberación enzimática de difenol, en cantidades estequiométricas con la especie oxitirosinasa, con determinaciones directas mediante cromatografía de gases / espectrometría de masas, así como evidencias indirectas comprobando la estequiometría variable de la reacción, ante diversas condiciones de ensayo. Se han diseñado experimentos y simulaciones por integración numérica del correspondiente sistema de ecuaciones diferenciales, para comprobar la validez de diversos mecanismos de reacción alternativos. Se ha deducido la expresión analítica del Factor de Autoactivación de Velocidades (RAF), parámetro cinético útil para cuantificar la autoactivación catalítica en la actividad monofenolasa de tirosinasa. En conjunto, se ha demostrado la validez del mecanismo de reacción propuesto para la enzima tirosinasa por el equipo investigador, descartando erróneos mecanismos propuestos por otros autores. Además, se han determinado diversas constantes cinéticas que caracterizan las actividades monofenolasa y difenolasa, en tirosinasas de diversas fuentes biológicas.