Caracterización de nuevas esterasas con interés biotecnológico obtenidas mediante clonación directa y metagenómica

Résumé

Se trabajo en el aislamiento, clonacion en E. coli Rosetta, sobreexpresion y caracterizacion bioquimico-estructural de diferentes esterasas procedentes de ambientes muy heteregeneos y poco comunes. Tanto directamente a partir del genoma de microorganismos alcalifilicos, tales como Bacillus halodurans C-125 (2), y Oceanobacillus iheyensis; como a partir de librerias metagenomicas. Mas concretamente: ¿h Se consiguio el aislamiento y la clonacion del gen BH1115, que codifica una proteina putativa de Bacillus halodurans C-125 que fue provisionalmente clasificada como una Ramnogalacturonan acetil esterasa (RGAE) en la familia CE-12. Esta proteina (BhRGAE) fue clonada, expresada en Escherichia coli Rosetta (DE3), purificada y caracterizada. La enzima fue monomerica con un peso molecular de 45 kDa y presento propiedades alcalifilicas. ¿h Ademas, la enzima BhRGAE presentaba una putativa region de union a substrato en N-terminal, que nunca habia sido descrita hasta ahora para ninguna RGAE, que hizo que esta nueva estructura, a la que denominamos Bahalodurin, diera lugar a otro trabajo del estudio de interacciones frente a diferentes substratos. ¿h Tambien se clono OiCCD, proteina putativa de Oceanobacillus iheyensis que fue provisionalmente clasificada como una Cefalosporina C deacetilasa (CCD) en la familia CE-12 (3). Esta proteina fue clonada, expresada en E. coli BL21(DE3), purificada y caracterizada. La enzima fue monomerica con un peso molecular de 31 kDa y presento propiedades alcalifilicas (pH optimo