Estudio de la expresión de un gen de poligalacturonasa de alfalfa en "Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe, Pichia pastoris y Arabidopsis thaliana"

Résumé

La pared celular vegetal es la responsable dela coherencia delos tejidos en plantas. La pared celular está constituida por diversas moléculas. Esta formada por una serie de microfibrillas de celulosa embebidas en una matriz formada pro diversos polisacáridos (hemicelulosas y pectinas) y glicoproteínas. Las pectinas son un grupo de polisacáridos complejos, se localizan en los espacios intercelulares, formando parte de la lámina media, y por tanto, son los principales responsables de la coherencia de los tejidos de las plantas. Una de las enzimas de actúan sobre la pectinas son las poligalacturonasas, que hidrolizanla moléculas de homogalacturonano, uno de los componentes de las pectinas. Las poligalacturonasas tienen importantes aplicaciones industriales ya que se utilizan para el procesado de frutos para su maceración y licuefacción previo uso en los procesos industriales. También se emplean para la obtención de aceites esenciales y carotenoides a partir de las pieles de cítricos. Aunque u su más extendido es la clarificación, la adición de estas enzimas permite disminuir la viscosidad y obtener mayor cantidad de zumo bebido a una menos colmatación de los filtros. La industria vinícola también las emplean, añadiéndolas al comienzo de la fermentación. En esta tesis se ha estudiado una poligalacturonasa de alfalfa implicada en el proceso de simbiosis entre la planta y Rhizobium, el gen MsPG3. Se clonó este gen para su expresión en bacterias y levaduras Saccharomyces cerevisiae, Schizosaccharomyces pombe y Pichia pastoris. En todos los organismos empleados se detectó la producción de cierta cantidad de enzima, pero la cantidad es tan pequeña que el empleo de estas estirpes transformadas para obtener la enzima en grandes cantidades no es viable. Otro de los objetivos marcados en la tesis ha sido el efecto del estudio dela sobreexpresión del gen en plantas. Se empleó Arabidopsis thaliana debido a que es la pla