Mycoplasma bovis infection in Spanish cattle herds and evaluation of new control strategies

Resumen

El objetivo general de esta tesis por compendio es contribuir a una mejor comprensión de la infección por Mycoplasma bovis y de la biología del patógeno, así como al establecimiento de nuevas medidas de control. Los objetivos específicos y la metodología seguida fueron: 1) Evaluar la presencia y circulación de M. bovis en rebaños bovinos españoles, empleando una gran colección de muestras obtenidas de ganado bovino de carne y de leche, y de distintas fuentes; 2) Investigar la circulación de diferentes subtipos mediante secuenciación unilocus del gen polC, estudiando diferencias de susceptibilidad antimicrobiana entre los subtipos y la presencia de mutaciones genéticas que confieren resistencia; 3) Evaluar el papel de M. bovis en la enfermedad respiratoria clínica sin respuesta al tratamiento antimicrobiano en terneros de cebo en España, mediante bacteriología, histopatología e inmunohistoquímica, y determinar los valores de concentración mínima inhibitoria de los aislamientos obtenidos al set de antimicrobianos empleados para el tratamiento in vivo; 4) Investigar si la transferencia cromosómica de los micoplasmas puede ocurrir en el campo, analizando la presencia de genomas en mosaico en aislamientos de M. bovis mediante secuenciación del genoma completo; 5) Evaluar la viabilidad de M. bovis en semen diluido tras la adición de un antimicrobiano (enrofloxacino o doxiciclina), o un probiótico a base de Lactobacillus spp. a diferentes concentraciones en condiciones in vitro; 6) Evaluar la viabilidad de M. bovis en moco cervical tras la adición de un probiótico a base de Lactobacillus spp. a diferentes concentraciones en condiciones in vitro. Los resultados obtenidos permiten concluir que: 1) M. bovis se encuentra ampliamente distribuido en los rebaños españoles de bovino de carne y está implicado en casos de mastitis en los rebaños de leche; 2) Los aislamientos españoles de M. bovis se dividen en dos grupos, el ST2 y el ST3, siendo ambos resistentes a los macrólidos, lincosamidas y tetraciclinas. La mayoría de los aislamientos del ST3 son resistentes a las fluoroquinolonas, situación que ilustra la notable capacidad del ST3 de acumular mutaciones en las regiones determinantes de resistencia a quinolonas y la presión selectiva impuesta por el uso indiscriminado de estos antimicrobianos. La valnemulina ha mostrado ser eficaz frente a ambos subtipos in vitro; 3) M. bovis juega un papel importante en casos clínicos de enfermedad respiratoria en terneros de cebo en España. La bronconeumonía caseonecrótica es el patrón morfológico más frecuentemente observado en los animales infectados con M. bovis y los patrones indicativos de otras especies bacterianas y virus pueden ser detectados simultáneamente; 4) Los aislamientos de M. bovis recuperados de animales con enfermedad respiratoria clínica son resistentes in vitro a la mayoría de los antimicrobianos empleados para el tratamiento in vivo; 5) La coexistencia de linajes de M. bovis a nivel de rebaño e incluso a nivel de animal permite eventos de transferencia genética horizontal como la transferencia cromosómica de los micoplasmas. Estos eventos contribuyen a la amplia diversidad del genoma y podrían tener un impacto negativo en el diagnóstico y control de la enfermedad; 6) En las condiciones analizadas, la adición de Lactobacillus spp., enrofloxacino o doxiciclina afecta negativamente a la viabilidad de M. bovis en semen diluido, lo que podría ser de utilidad para el tratamiento de las dosis seminales y reducir el riesgo de transmisión de M. bovis durante la inseminación artificial. La dilución con el diluyente seminal Tris-citrato-fructosa también afecta negativamente a la viabilidad del agente, aunque en menor medida que la adición del probiótico y antimicrobianos; 7) En las condiciones analizadas, la adición de Lactobacillus spp. afecta negativamente a la viabilidad de M. bovis en moco cervical, lo que podría ser de utilidad para controlar la proliferación de M. bovis el tracto cérvico-vaginal de las vacas.