Comparación de dos métodos para el aislamiento y purificación de la proteína c-reactiva (CRP) canina

Resumen

La proteína C-reactiva (CRP) es una de las principales proteínas de fase aguda en el perro con un incremento rápido y pronunciado en respuesta a la infección o el daño tisular. Numerosos estudios clínicos y experimentales indican que el análisis de la proteína ayuda en la evaluación, diagnóstico y monitorización de diversas enfermedades infl amatorias. La disponibilidad de CRP canina pura permitiría su empleo como estándar en inmunoensayos de la CRP canina o como inmunógeno de cara a la obtención de anticuerpos anti- CRP canina. En el presente trabajo, se aisló la CRP a partir de suero de fase aguda canino, recurriendo a dos técnicas diferentes: 1. Inmunopurifi cación, empleando anticuerpos policlonales anti-CRP canina unidos a una matriz de sefarosa activada con bromuro de cianógeno. 2. Cromatografía de afi nidad, usando una columna con fosforiletanolamina unida a agarosa a través de enlace epoxi. La pureza de las proteínas obtenidas con las dos metodologías fue valorada mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Ambas técnicas son aptas para purifi car la CRP canina, aunque la cromatografía de afi nidad proporcionó un mejor rendimiento tanto en su pureza como en la cantidad de CRP obtenida. Además, la cromatografía de afi nidad es una alternativa más barata, ya que no precisa el uso de anticuerpos, que normalmente son reactivos de coste elevado.