The effect and regulation mechanism of CircHIAT1 on polycystic ovary syndrome

Resumen

Parte I: Expresión diferencial del circRNA en el síndrome de ovario poliquístico (SOP) Objetivo: Se ha encontrado que el ARN circular (ARNrc) desempeña un papel importante en muchas enfermedades, sin embargo, ha habido una investigación limitada centrada en el ARNcc en la enfermedad del SOP. Por lo tanto, intentamos detectar la expresión de circRNAs en el cumulus oophorus (CO) de pacientes con PCOS mediante secuenciación de alto rendimiento, para explorar el papel y el posible mecanismo de circRNAs en la patogénesis de PCOS. Métodos: Los CO de pacientes de FIV / ICSI se recolectaron al azar. Seleccionamos 3 pares de muestras para secuenciación de alto rendimiento. Se seleccionaron 14 circRNA expresados diferencialmente para la validación clínica en CO. Resultados: Se detectaron un total de 55,776 circRNAs expresados diferencialmente. En comparación con el grupo de control, 7,047 circRNAs fueron significativamente regulados por incremento y 48,729 fueron significativamente regulados por disminución en el grupo de SOP. El análisis GO mostró que los circRNA podrían ser activos en el metabolismo celular, la regulación biológica y la catálisis activa del SOP. El análisis de la ruta KEGG indicó que los circRNA podrían participar en la transducción de señales, el transporte de sustancias y el catabolismo, la endocitosis y la vía de proteólisis mediada por ubiquitina. En pacientes con SOP, la expresión de circ_0011693, circ_0042454, circ_0001365, circ_0006252 y circ_0003737 fue significativamente mayor y la expresión de circHIAT1 fue significativamente menor. Conclusiones: El estudio encontró los perfiles de expresión diferencial de circRNA en SOP por primera vez. El análisis bioinformático mostró que los circRNA expresados diferencialmente podrían participar en múltiples vías relacionadas con las enfermedades de SOP. Por lo tanto, el efecto y la regulación de circRNA en SOP merecen un estudio más a fondo. Palabras clave: Síndrome de ovario poliquístico / cumulus oophorus / ARN circular / Secuenciación de alto rendimiento. Parte II: Los efectos de CircHIAT1 sobre la esteroidogénesis en el síndrome de ovario poliquístico mediante esponja de miR-195-5p Objetivo: Nuestra hipótesis es que circHIAT1 podría regular la función de los CO esponjando miR-195-5p, participando así en la regulación del SOP. Métodos: El estudio detectó la co-localización de circHIAT1 y miR-195-5p en CO por RNA-FISH. Se utilizaron qRT-PCR y Western Blot para detectar los efectos de circHIAT1 en AR, CYP19A, GATA4 y VEGF en la línea celular KGN pretratada con DHT. Se utilizó FACS para detectar el ciclo celular. La relación de direccionamiento de circHIAT1 / miR-195-5p y miR-195-5p / CCNE1 se detectó mediante un ensayo de indicador de luciferasa dual. Se detectó la expresión de miR-195-5p y CCNE1 en muestras clínicas. Se verificaron los efectos de miR-195-5p y CCNE1 en AR, CYP19A, GATA4, VEGF y ciclo celular. Resultados: circHIAT1 y miR-195-5p se localizaron en el citoplasma de CO primarias y células KGN. El silenciamiento circHIAT1 podría aumentar significativamente los niveles de AR, CYP19A, GATA4 y VEGF, y conducir a la disminución de la viabilidad celular en las células KGN. circHIAT1 podría unirse a miR-195-5p. miR-195-5p se encontró altamente expresado en COs de pacientes con SOP. La sobreexpresión de miR-195-5p podría aumentar significativamente los niveles de AR, CYP19A, GATA4 y VEGF en células KGN, y dio como resultado una disminución significativa de la viabilidad celular. miR-195-5p podría unirse a CCNE1. El nivel de expresión de CCNE1 en el grupo de SOP fue significativamente menor. Conclusión: el silenciamiento de circHIAT1 podría aumentar significativamente los indicadores relacionados con la esteroidogénesis, inhibir el ciclo celular de las células KGN. Por lo tanto, circHIAT1 podría utilizarse como un nuevo objetivo para el diagnóstico y tratamiento del SOP. Palabras clave: circHIAT1 / línea celular tumoral tipo granulosa humana / esteroidogénesis / ciclo celular