Papel del dominio c2 en la regulacion de la activacion de la proteina quinasa c

Resumen

Las PKCs constituyen una familia de serin-treonin quinasas con importantes funciones en el control de procesos celulares como la proliferación y la diferenciación celular. Esta familia se divide en tres grupos de isoenzimas(clasicas, nuevas y atipicas) dependiendo de su estructura primaria y de los requerimientos de acticadores y cofactores para su regulación como el Ca2+, el diacilglicerol (DAG) y los fosfolipidos aniónicos. Las PKCs clasicas pueden ser activadas por Ca2+, el diacilglicerol (DAG) y los fosfolipidos aniónicos. La PKCs clasicas pueden ser activadas por Ca2+ y/o por DAG o esteres de forbol. En estas iosenzimas, la region reguladora esta comopuesta por dos dominios conservados: el dominio C1, al que se unen eldiacilglicerol (DAG) y los esteres de forbol, y el dominio C2, al que se unen el Ca2+ y la fosfatidilserina (PS). Las PKC nuevas pueden seractivadas por DAG o esteres de forbol pero de manera independiente de Ca2+ y aunque tambien contiene estos dos dominios reguladores, el dominio C2 no tienen los grupos funcionales necesarios para que se enlace el Ca2+. Por ultimo las PKC atipicas no son reguladas ni por Ca2+ni por DAG y carecen del dominio C2. En este trabajo realizamos mutaciones puntuales en el sistio de union a calcio del dominio C2 de la PKC clasica, PKCalfa encontrandose que los residuos, D187,D246 y D248, están implicados en la capacidad de la proteina para traslocarse a la membrana y tambien en la actividad catalitica de la enzima. Los dominios C1 y C2 estan relacionados pues uno de estos residuos, el D187, participa tanto en la union de la enzima a la membrana como en la activacion inducida por el DAG. Las mutaciones en los union a fosfatidlserina (PS) del dominio C2 de esta isoenzima han permitido saber que los residuos T251,R216 y R249, estan directamente implicados en el enlace a fosfolipidos aniónicos y tambien en la posterior activacion de la enzima. Ademas, se ha encontrado que N189 puede actuar