Purificación y caracterización del complejo nad(p)h-deshidrogenasa de cloroplastos de cebada (hordeum vulgare l.)

Resumen

Existen evidencias de la presencia en cloroplastos de una cadena transportadora de electrones semejante a alguna porción de la cadena mitocondrial, que contendría un complejo nad(p)h-deshidrogenasa semejante al de mitocondrias. En este trabajo se ha intentado purificar y caracterizar el complejo nad(p) deshidrogenasa de cloroplastos de cebada. Se inició el trabajo ensayando la pureza de las preparaciones de cloroplastos y su posible contaminación por mitocondrias. Una vez comprobada la insignificante contaminación de cloroplastos por mitocondrias se estudiaron los efectos de distintos detergentes sobre la solubilización del enzima, pudiéndose observar que desoxicolato ofreció los mayores rendimientos. También se estudió la lozalizacion subcloroplastica del enzima. Posteriormente se pasó a la purificación del enzima por diversas técnicas: precipitación con sulfato anonico, isoelectroenfoque, cromatofrafia mediante la técnica de fplc en columna ñ y de hidroxilapatito y electroelucion a partir de geles. Estos experimentos de purificación se completaron con electroforeses nativa de las fracciones obtenidas. Globalmente considerados los resultados demuestran la existencia en tilacoides de un complejo nad(p)h-deshidrogenasa cloroplastico asociado al enzima ferredoxina-nadp oxido-rreductasa.