Clonacion y caracterizacion molecular del gen de la sintetasa del acetil-coa (faca) del hongo phycomyces blakesleeanus

Résumé

SE HA CLONADO EL GEN QUE CIFRA LA SINTETASA DE ACETIL-COA (FACA) DEL HONGO PHYCAMYCES BLAKESLEEANUS. LA PROTEINA QUE SE DEDUCE A PARTIR DE LA SECUENCIA DE NUCLEOTIDOS DE DICHO GEN PRESENTA UNA GRAN HOMOLOGIA CON LAS SINTETASAS DE ACETIL-COA CONOCIDAS. GRACIAS A ELLO SE HA PODIDO DEDUCIR LA EXISTENCIA DE CUATRO INTRONES EN DICHO GEN. LA EXPRESION DEL GEN FACA ES INDUCIBLE POR LA PRESENCIA DE ACETATO, COMO UNICA FUENTE DE CARBONO, INDUCIENDOSE LA SINTESIS DE UN RNAM DE 2,3 KB, QUE COINCIDE CON EL ESPERADO A PARTIR DEL ESTUDIO DE LA SECUENCIA DEL GEN. LA TRANSCRIPCION DEL GEN FACA COMIENZA 71 NUCLEOTIDOS AGUAS ARRIBA DEL POSIBLE COMIENZO DE LA TRADUCCION, EN UN CONTEXTO TIPICO DE PROMOTORES DE HONGOS FILAMENTOSOS. EL GEN FACA DE P. BLAKESLEEANUS NO SE EXPRESA EN EL ASCOMICETO ASPERGILLUS NIDULANS. CUANDO SE SUSTITUYE EL PROMOTOR DEL GEN FACA DE P. BLAKESLEEANUS POR UN PROMOTOR CONSTITUTIVO DE A. NIDULANS, SE RECUPERA PARCIALMENTE EL FENOTIPO SILVESTRE EN LA ESTIRPE FACA DE A. NIDULANS UTILIZADA EN LOS EXPERIMENTOS DE TRANSFORMACION. LA CLONACION DEL GEN FACA DE P. BLAKESLEEANUS PERMITE DISEÑAR UN NUEVO PROCEDIMIENTO DE TRANSFORMACION GENETICA PARA DICHO HONGO, BASADO EN LA COMPLEMENTACION DE UNA MUTACION QUE AFECTE AL GEN DE LA SINTETASA DE ACETIL-COA. EN ESTE TRABAJO SE HA INICIADO EL DESARROLLO DE DICHO SISTEMA DE TRANSFORMACION, CON EL AISLAMIENTO DE MUTANTES DE P. BLAKESLEEANUS INCAPACES DE UTILIZAR ACETATO COMO FUENTE DE CARBONO. LA CARACTERIZACION DEFINITIVA DE ESTOS MUTANTES PERMITIRA CONOCER LA UTILIDAD DE ESTE SISTEMA COMO PROCEDIMIENTO PARA TRANSFORMAR P. BLAKESLEEANUS.