Caracterizacion morfologica y activacion "in vitro" de los leucocitos de dorada (sparus aurata l.), para la obtencion de sobrenadantes conteniendo mediadores de la respuesta inmunitaria

Zusammenfassung

EL PRESENTE TRABAJO TIENE DOS OBJETIVOS. EL PRIMERO ES CARACTERIZAR LOS LEUCOCITOS DE DORADA PRESENTES EN RIÑON CEFALICO, SANGRE Y EXUDADO PERITONEAL, MEDIANTE METODOS MORFOLOGICOS Y CITOQUIMICOS, TANTO MICROSCOPICO OPTICOS COMO MICROSCOPICO ELECTRONICOS. LOS RESULTADOS MUESTRAN QUE SE CUMPLE EL PATRON HEMATOLOGICO DE VERTEBRADOS. ESTAN PRESENTES TROMBOCITOS, GRANULOCITOS, CELULAS LINFOIDES Y MONOCITOS/MACROFAGOS. SIN EMBARGO, ESTAS CELULAS PRESENTAN EN DORADA CARACTERISTICAS ESPECIFICAS QUE LAS DIFERENCIAM DE LAS DE OTROS VERTEBRADOS. EL SEGUNDO OBJETIVO ES LA ACTIVACION DE LOS LEUCOCITOS DE DORADA PARA OBTENER SOBRENADANTES CONTENIENDO MEDIADORES SOLUBLES, CAPACES DE ACTIVAR LOS MACROFAGOS DE ESTA ESPECIE. SUSPENSIONES CELULARES ENRIQUECIDAS EN LEUCOCITOS, OBTENIDOS MEDIANTE CENTRIFUGACION EN GRADIENTE DE DENSIDAD, FUERON ESTIMULADOS CON EL MITOGENO CONCANAVALINA A. SE HAN OPTIMIZADO LAS CONDICIONES DE LOS ENSAYOS PARA LA OBTENCION DE LOS SOBRENADANTES (CONCENTRACION DE MITOGENO, TIEMPO DE ESTIMULACION Y PROCEDENCIA DE LOS LEUCOCITOS), SE HA MEDIDO LA ACTIVIDAD DE LOS SOBRENADANTES, MEDIANTE EL USO DE TECNICAS DE ESPECTROFOTOMETRIA BASADAS EN LA REDUCCION DE UNA SAL DE TETRAZOLIO ("NBT") Y FINALMENTE, SE HAN DETERMINADO CONDICIONES OPTIMAS DE ENSAYO PARA ACTIVAR LOS MACROFAGOS DE DORADA (DILUCION DE LOS SOBRENADANTES, TIEMPO DE INCUBACION CON LOS SOBRENADANTES, NUMERO DE LEUCOCITOS Y PROCEDENCIA DE LOS LEUCOCITOS.