Validación analítica y clínica de un método inmunoturbidimétrico automatizado para la determinación de haptoglobina en el perro

Resumo

En este trabajo se ha validado desde el punto de vista analítico y clínico en la especie canina, un kit comercial para determinar haptoglobina (Hp) (Izasa SA, Barcelona, España), el kit está basado en una reacción inmunoturbidimétrica que emplea anticuerpos contra la haptoglobina humana. En un primer lugar se realizaron pruebas de reactividad cruzada entre el anticuerpo anti-haptoglobina proporcionado por el kit y la haptoglobina de la especie canina. Para esto se emplearon técnicas de immunodifusión el gel de agarosa y un ELISA. Ambos métodos demostraron que el anticuerpo contra la haptoglobina humana reconoce la haptoglobina de perro, y que la unión entre los dos es proporcional a la concentración de hp. Por lo tanto el kit objeto de nuestro estudio se puede emplear en el perro. También se estudió el efecto que producía en el kit comercial el empleo de un estándar de perro, que dio lugar a una mejora de la precisión y especificidad, y un aumento del rango de medida; evitando de esta forma la necesidad de diluir previamente las muestras de perro, como ocurre con los kits comerciales actuales. Una vez optimizado el método se realizó la validación analítica. Inicialmente se calculó la precisión, exactitud y límite de detección; dando resultados en todos los casos muy satisfactorios; sobre todo destacó el aumento de precisión con respecto a los métodos manuales, y el bajo límite de detección que demuestra la capacidad del método para detectar pequeñas cantidades de Hp, además de no existir interferencias entre los componentes del kit. Posteriormente se estudiaron los efectos de substancias capaces de provocar interferencias como hemólisis, lipemia y bilirrubinemia; siendo muy significativo el descenso que produce la hemólisis en las concentraciones de haptoglobina, por lo que no se recomienda emplear este método en muestras de suero o plasma con diferentes anticoagulantes como heparina, EDTA o citrato