Desarrollo de protocolos de regeneración de plantas via embriogenesis somatica y de transformación en vid (vitis vinifera l.)

Résumé

En la Memoria de investigación presentadas se abordan dos objetivos principales: 1,- Desarrollar un protocolo de regeneración de plantas de vid por embriogenesis somática. 2,- Establecer los parámetros básicos para la transformación de células de callo embriogénico mediante cocultivo con agrobacteium tumefaciens. Los resultados obtenidos en el primer objetivo han permitido establecer un protocolo de regeneración de plantas de vid por embriogénesis somática en tres variedades de uva de mesa (crimson seedless, sugraone y don mariano). El tipo de explanto (anteras u ovarios), la adición al medio de cultivo de carbón activo y la morfología de los embriones somáticos diferenciados a partir del callo embriogénico son los tres factores que más han afectado a la eficiencia del protocolo de regeneración. Una vez obtenido callo embriogénico y establecido el protocolo de regeneración, se abordó la transformación de células vegetales mediante agrobacterium en las variedades crimson seedless y sugraone. El establecimiento de un procedimiento de transformación con una alta eficiencia se dividió en tres fases: 1,- Establecimiento de la concentración idónea del antibiótico kanamicina. Los experimentos realizados mostraron que los callos embriogénicos de crimson seedless y sugraone mostraron diferente sensibilidad a la kanamicina. Mientras que en la variedad crimson seedless se inhibió la diferenciación de embriones somáticos con 20 mg/l de kanamicina, en la variedad sugraone fueron necesarios 50 mg/l. 2,- Influencia de la cepa de agrobacterium y la densidad de inoculo. Los estudios de transformación se abordaron con dos cepas de agrobacterium distintas (EHA 105 y C58(pMP90)). Así mismo ambas cepas se utilizaron a distintas densidades de inoculo (DO600 = 0,06 y 0,2). En todos los casos la cepa EHA 105 mostró más eficiencia y se demostró que la densidad de inoculo más eficiente era diferente según la varie