Analisis traduccional y post-traduccional de una proteina implicada en la regulacion de la fotocarotenogenesis en mucor circinelloides

Resumen

Mucor circinelloides es un hongo filamentoso que presenta diversas respuestas a la luz azul, entre ellas, la inducción de la biosíntesis de carotenos. El gen crgA, un gen inducido por luz, actua como regulador negativo de la carotenogénesis en este hongo, ya que la deleción completa del gen en la estirpe silvestre conduce a una sobreacumulación de carotenos en los micelios en condiciones de luz y oscuridad. El efecto represor de crgA sobre la biosíntesis de carotenos se lleva a cabo mediante el control de la expresión de los genes carotenogénicos estructurales. La comparación de la secuencia de aminoácidos de CrgA con secuencias depositadas en las bases de datos sugiere que la traducción de CrgA podría comenzar en un codón GUG localizado 201 pb aguas arriba de codón AUG inicialmente propuesto como inicio de la traducción de crgA. Para determinar si este codón GUG es el iniciador de CrgA, se han provocado, mediante mutagénesis dirigida, sustituciones en los codones GUG y AUG localizados en el extremo 5¿ de crgA. Estos alelos mutantes se usaron para transformar la estirpe nula para crgA, y el efecto de estos alelos sobre la carotenogénesis se comparó con el causado tras la introducción del alelo silvestre. Los resultados obtenidos han permitido confirmar que el codón GUG es el codón de inicio de la traducción de crgA. La secuencia de aminoácidos deducida del gen crgA muestra distintas regiones estructurales significativas: un dominio RING-finger, una señal de localización nuclear, tramos ricos en glutaminas y un dominio de isoprenilación. El dominio RING-finger y el primer tramo de poliglutaminas, son esenciales para la regulación de la síntesis de carotenos por CrgA en M. circinelloides. Sin embargo, la demostración de que la traducción de la proteína CrgA comienza en el codón GUG confirma la presencia de un dominio RING-finger adicional, además, recientemente se ha identificado un dominio LON. Con el objetivo de caracterizar el pap