Desarrollo y validación de un método para el análisis de opiáceos y cocaína en tejido óseo humano

Resumen

La utilización en Medicina Legal y Forense del hueso como matriz para análisis toxicológicos, ha sido investigada ampliamente desde el año 2000, dando lugar en un período relativamente corto de tiempo, a una expansión significativa del número de compuestos detectados en dicho tejido. Aunque se han descrito estudios empleando tejido óseo humano post-mortem, principalmente se han desarrollado investigaciones con animales de experimentación bajo condiciones controladas de dosis, vía de administración, patrones de exposición a la sustancia, tiempo transcurrido entre la última administración y la muerte, grado de descomposición, etc. En estos estudios, se han analizado diferentes tipos de tejido óseo y se han empleado una variedad de métodos de extracción de las sustancias de la matriz ósea, como la extracción líquido-líquido, en fase sólida o asistida por microondas, así como diferentes métodos de análisis y detección (ELISA, ELISA-LC-MS, UPLC-MS, GC-MS, etc.). A pesar de la gran progresión en el estudio del hueso como matriz toxicológica en los últimos años, no existen protocolos estandarizados para la extracción y cuantificación de sustancias en esta matriz en humanos. Es importante destacar que, entre las distintas sustancias de abuso existentes, los opiáceos y la cocaína constituyen un grupo de gran interés médico-legal ya que se trata de drogas de una elevada prevalencia de consumo y responsables de la mayor parte de daños agudos relacionados con drogas. Los opiáceos son las drogas que mayor número de sobredosis generan, mientras que las muertes producidas por cocaína han aumentado en los últimos años, aunque muchas de estas muertes parecen ser realmente sobredosis por heroína en personas que también consumían cocaína. Por tanto, el propósito de este estudio es desarrollar y validar un método para el análisis de opiáceos y cocaína en hueso humano de manera simultánea. Para demostrar la fiabilidad y robustez del método y para investigar de forma preliminar la relación entre las concentraciones óseas y sanguíneas, el método se aplicará a muestras óseas de pacientes fallecidos cuyo análisis toxicológico para estas sustancias de abuso en sangre fue positivo. Se recogieron fragmentos costales de 100 cadáveres autopsiados en el Instituto de Medicina Legal de Murcia. Las muestras óseas fueron desecadas, pulverizadas, e incubadas con acetonitrilo en un baño de ultrasonidos. La solución resultante fue sometida a una extracción en fase sólida y para el análisis se empleó la cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas. El método fue validado en el rango de concentraciones de 0,3-1 ng/mg (dependiendo de la sustancia) a 150 ng/mg, las recuperaciones absolutas medias oscilaron entre el 66% y el 110%, el efecto de la matriz del 62% al 121% y la eficiencia del proceso de 61% a 89% dependiendo del analito. Los valores de precisión intra e inter-ensayo fueron en todos los casos mejores de 20%. El método validado se aplicó con éxito a muestras óseas humanas extraídas de 6 cadáveres cuyo análisis toxicológico en sangre para las sustancias en estudio fue positivo. Las sustancias fueron detectadas en hueso en 12 de los 15 resultados positivos en sangre. El rango de concentración aproximado fue de 3 a 5 ng/g para 6-monoacetilmorfina, 3 a 7 ng/g para morfina, 14 a 28 ng/g para metadona y 6 ng/g y 11 ng/g para tramadol y benzoilecgonina.