Nuevos marcadores trombogénicos en fibrilación auricularimplicación de los microrna en la regulación del componente celular e inflamatorio de la trombosis

Resumen

La fibrilación auricular (FA), la arritmia cardiaca sostenida más común, se asocia con una alta morbi-mortalidad ya que aumenta el riesgo de sufrir eventos trombóticos. En los últimos años, la etiopatogenia de la FA se ha reconsiderado estableciéndose un vínculo biológico sólido entre trombogénesis e inflamación. La propia arritmia y la coexistencia de factores de riesgo cardiovascular van a favorecer la ocurrencia de eventos cardiovasculares adversos (ECA), siendo la rotura de placas ateroscleróticas el factor más frecuente. Las escala de riesgo clínico CHA2DS2-VASc es la más utilizada para estratificar el riesgo cardiovascular y facilitar la toma de decisiones sobre el tratamiento anticoagulante, aunque presenta una capacidad modesta para predecir los eventos tromboembólicos. Por ello, la búsqueda de nuevos biomarcadores resulta de gran utilidad para mejorar el conocimiento sobre la fisiopatología de la FA y ayudar a refinar la estratificación del riesgo en estos pacientes. En este sentido, los miRNA han surgido como actores críticos de la biología cardiovascular. En particular, miR-146a es un importante regulador negativo de respuestas inmunes e inflamatorias. Además, se han identificado miR-SNP funcionales que modulan los niveles de este miRNA y se asocian con patologías inflamatorias. Recientemente, las trampas extracelulares de neutrófilos (NET) también se han asociado con varias enfermedades inmunes e inflamatorias, incluyendo aterosclerosis y aterotrombosis. De hecho, la perpetuación de NET contribuye al daño tisular y a un estado protrombótico, constituyendo un vínculo entre inflamación y coagulación. En esta Tesis se ha estudiado la implicación de miR-146a y NET en el riesgo trombótico de pacientes con FA así como su potencial uso como biomarcadores de riesgo cardiovascular en esta patología. El trabajo se ha organizado en cuatro capítulos estructurados según los objetivos que se plantean a continuación. Objetivos: (1) Evaluar el papel pronóstico y el efecto biológico de miR-SNP funcionales de MIR146A en el desarrollo de ECA en FA (Capítulo I). (2) Investigar el papel de miR-146a restringido al compartimento hematopoyético en el desarrollo de aterosclerosis como patología promotora de ECA en FA (Capítulo II). (3) Investigar el papel de miR-146a en la formación de NET y en el desarrollo de trombosis arterial (Capítulo III). (4) Evaluar el papel pronóstico de los NET en el desarrollo de ECA en FA y su relación con el miR-SNP funcional de MIR146A rs2431697 (Capítulo IV). Material y métodos: Para lograr estos objetivos se utilizaron muestras biológicas de controles y pacientes con FA. Adicionalmente, se utilizaron varios modelos experimentales, incluyendo modelos murinos de sepsis, aterosclerosis y trombosis arterial, así como cultivos primarios de células humanas y de ratón. También se emplearon diversas técnicas de biología celular (citometría de flujo, inmunohistoquímica, inmunofluorescencia, microscopía intravital etc.), técnicas bioquímicas (western blot, ELISA, ensayos fluorimétricos y colorimétricos, etc.) y técnicas de biología molecular (extracción de ácidos nucleicos, genotipado y RT-qPCR). Los resultados obtenidos se analizaron utilizando en cada caso las pruebas estadísticas más apropiadas. Resultados y conclusiones: Los miR-SNP de MIR146A no se asociaron con el desarrollo de FA. Rs2910164 tampoco se relacionó con ECA, sin embargo el genotipo rs2431697 TT fue un nuevo predictor de riesgo de ECA. Además, los estudios funcionales in vitro en monocitos TT, con niveles más bajos de miR-146a, mostraron un estado pro-inflamatorio mayor que aquellos monocitos CC (Capítulo I). Por otro lado, la deficiencia de miR-146a en células hematopoyéticas moduló los niveles de colesterol en plasma y la expresión de sus dianas en la pared arterial de ratones Ldlr-/- alimentados con dieta grasa pero no aceleró el desarrollo de aterosclerosis (Capítulo II). Además, miR-146a reguló la formación de NET in vitro e in vivo en dos modelos murinos de inflamación (sepsis y aterosclerosis). La deficiencia de miR-146a provocó un mayor grado de trombosis arterial en un modelo murino de daño endotelial inducido con FeCl3 en carótidas (Capítulo III). También demostramos que los niveles plasmáticos de elastasa de neutrófilos, pero no de DNA libre, proporcionan nueva información pronóstica sobre mortalidad y ECA en FA. Finalmente, la variante funcional rs2431697 T, asociada con niveles más bajos de miR-146a, promovió una mayor formación de NET en neutrófilos humanos estimulados in vitro. De acuerdo con estos datos, los pacientes portadores de la variante T para rs2431697 tuvieron los niveles más altos de elastasa de neutrófilos en plasma. Todos estos resultados demuestran por primera vez la implicación de un miRNA en la formación de NET y el riesgo de ECA en FA (Capítulo IV). En conclusión, esta Tesis responde a la hipótesis de partida y aporta nueva información sobre el riesgo trombótico en FA. Además, proporciona información útil para mejorar la estratificación de riesgo trombótico en pacientes anticoagulados con FA.