Biomarcadores para la estimación del intervalo postmortem y la identificación de patologías en restos óseos humanos

Resumen

Resumen RESUMEN La estimación del intervalo postmortem es un objetivo importante en la medicina forense y sigue siendo una de las tareas más difíciles del investigador forense. En realidad, existen pocos métodos precisos para determinar el tiempo transcurrido desde la muerte de los restos humanos esqueletizados debido al gran número de factores intrínsecos que pueden alterar el curso normal del cambio postmortem, como la edad, el sexo, la constitución y los estados fisiológicos y patológicos previos de la enfermedad del sujeto y factores externos. El primer objetivo de esta investigación es evaluar la utilidad de diversos parámetros bioquímicos como las bases nitrogenadas (adenina, guanina, purinas, citosina, timina, pirimidinas, hipoxantina, xantina, cociente de purinas/pirimidinas y cociente de pirimidinas/purinas), ADN y péptidos de colágeno tipo I en el hueso cortical para la establecimiento del IPM en un total de 80 huesos largos de 80 cadáveres (50 hombres, 27 mujeres y 3 indeterminados) con una edad media de 68.31 años (DE=18.021, rango=20-97). Los huesos fueron retirados de los nichos de cemento de un cementerio de Murcia (sudeste de España), donde habían permanecido entre 5 y 47 años (tiempo medio 23.83 años, DE=10.85). El procedimiento seguido para la determinación de bases nitrogenadas, ácidos nucleicos y péptidos de colágeno tipo I fue la realización de HPLC-UV, fluorimetría y HPLC-MS/MS, respectivamente. Nuestros resultados confirman que el hueso es una matriz adecuada para la extracción, identificación y cuantificación, mediante los protocolos y técnicas empleadas, de ADN, bases nitrogenadas y péptidos de colágeno tipo I en un IPM entre 5 y 47 años. Además, nuestra investigación muestra como las concentraciones de adenina respecto a guanina, de timina respecto a citosina y de purinas respecto a pirimidinas son significativamente superiores en este IPM, así como el establecimiento de correlaciones significativas negativas entre las bases nitrogenadas y los péptidos de colágeno tipo I analizados y el IPM, que siguen un modelo de decrecimiento exponencial y logarítmico, respectivamente. En un IPM inferior a 20 años las concentraciones de varias bases nitrogenadas y de los péptidos de colágeno tipo I son significativamente superiores frente a un IPM superior o igual a 20 años, además, existe una correlación significativa negativa entre las biomoléculas y estos intervalos, con una tendencia Resumen exponencial. El uso de forma conjunta de todos los biomarcadores cuantificados en esta investigación permite la correcta clasificación de muestras en grupos de IPM inferior a 20 años y superior o igual a 20 años del 86.7%. Por otro lado, otro de los problemas que presenta la medicina forense es la identificación de los sujetos, en este caso, la patología forense a menudo utiliza la osteobiografía, que implica perfiles biológicos basados en la determinación de la edad, sexo, constitución, estados patológicos y otras anomalías (paleopatología) de los sujetos con fines de identificación. El segundo objetivo de esta investigación es analizar las proteínas en restos óseos para buscar biomarcadores patológicos que estén estrechamente relacionados con varias enfermedades. Se utilizaron 45 huesos largos de 45 cadáveres diferentes (29 varones, 16 mujeres) con una edad media de 66.31 años (DE=19.48, rango=20-97). Los huesos se encontraban en nichos de cemento de un cementerio murciano (sudeste de España), donde habían permanecido entre 18 y 45 años (tiempo medio 25.84 años, DE=8.91). Después de una extracción específica utilizando tampón Tris-Urea, se identificaron usando HPLC-MS/MS. Nuestros resultados muestran que las proteínas resultantes de enfermedades tumorales y patógenos bacterianos y virales pueden ser detectados e identificados en los restos óseos, convirtiéndolos en biomarcadores patológicos útiles para la construcción de perfiles biológicos. Palabras Clave: Bases nitrogenadas, ADN, Péptidos de colágeno tipo I, Hueso, Intervalo postmortem, Identificación, Biomarcadores patológicos, Perfiles biológicos.