Aislamiento y cultivo de leucocitos de riñon cefalico, sangre y exudado peritoneal de lubina (dicentrarchus labrax l.) caracterizacion morfologica y ensayos de fagocitosis

Abstract

EL ESTUDIO DE LOS MECANISMOS DE DEFENSA EN PECES, SOBRE TODO EN TELEOSTEOS DE INTERES COMERCIA, COMO ES EL CASO DE LA LUBINA, ES DE GRAN IMPORTANCIA YA QUE, CON EL DESARROLLO ACTUAL DE LA ACUICULTURA SE PRODUCEN SITUACIONES DE ESTRES EN LOS PECES EN CULTIVO, QUE PROVOCAN LA MUERTE DE NUMEROSOS EJEMPLARES, CAUSANDO GRANDCES PERDIDOAS ECONOMICAS EN LAS EXPLOTACIONES. EN LA ACTUALIDAD, EL ESTUDIO "IN VITRO" DE LAS CELULAS DEL SISTEMA INMUNITARIO DE PECES SE REALIZA MEDIANTE APLICACION DE TECNICAS CREADAS PARA MAMIMEROS, NO EXISTIENDO METODOS ADECUADOS Y ESPECIFICOS PARA PECES. LA PRESENTE TESIS DOCTORAL TIENE COMO OBJETO EL AISLAMIENTO Y CULTIVO DE CELULAS DE RIÑON CEFALICO, SANGRE Y EXUDADO PERITONEAL DE LUBINA CON LA INTENCION DE EVALUAR Y OPTIMIZAR LA METODOLOGIA, ASI COMO DE CONOCER LAS PROPIEDADES DE VIABILIDAD Y ADHERENCIA "IN VITRO" DE DICHAS CELULAS, LAS CUALES SON CARACTERIZADAS MORFOLOGICAMENTE Y SOMETIDAS A ESTUDIO FUNCIONAL DE FAGOCITOSIS FRENTE A DISTINTAS PARTICULAS. LA APLICACION DE TECNICAS DE CENTRIFUGACION EN GRADIENTES DE DENSIDAD DE PERCOLL MODIFICADOS PARA LEUCOCITOS DE LUBINA, PERMITE LA OBTENCION DE INTERFASES Y DE FRACCIONES ENRIQUECIDAS EN LEUCOCITOS. EL AISLAMIENTO Y EL CULTIVO DE DICHOS LEUCOCITO ASI COMO EL ANALISIS DE SUS REQUERIMIENTOS HA PERMITIDO ESTABLECER LAS CONDICIONES OPTIMAS DE VIABILIDAD Y ADHERENCIA DE ESTAS CELULAS. LOS LEUCOCITOS DE RIÑON CEFALICO, SANGRE Y EXUDADO PERITONEAL DE LUBINA PUEDEN SER CULTIVADOS SATISFACTORIAMENTE EN MEDIOS DE CULTIVO DISEÑADOS PARA MAMIFEROS, SIENDO REQUERIMIENTOS ESPECIFICOS LA ADICION DE LA NACL HASTA UNA OSMOLARIDAD DE 430 MOS, LA DE UN 10% DE SUERO BOVINO FETAL, TEMPERATURAS EN TORNO A LOS 25 C Y EL USO DE MEDIO RPMI 1640. DICHOS LEUCOCITOS DESPUES DEL PROCESADO AL QUE SON SOMETIDOS PARA SU AISLAMIENTO, SON MAYORITARIAMENTE CAPACES DE DESARROLLAR ACTIVIDAD DE ENDOCITOSIS, TANTO FRENTE A PARTICULAS INERTES (FERRITINA Y LATEX) COMO A BACTERIAS DEL GENERO A