Estudio de las Proteinas Quinasas C clasicas y su interaccion con ligandos y membranas

Résumé

La proteína quinasa C (PKC) participa en numerosas funciones fisiológicas a través de distintas rutas de señalización celular. El grupo de las isoenzimas clásicas de la PKC incluye a la PKC alfa, beta I, beta II y gamma y está regulado por diacilglicerol, ésteres de forbol, calcio y fosfolípidos aniónicos. La introducción de una insaturación en una de las cadenas de los diacilgliceroles que forman parte de la membrana modifica en gran medida la capacidad de activación de la PKC alfa de manera independiente a la presencia de fosfolípidos aniónicos y cationes divalentes. Los dominios C2 de las isoenzimas clásicas de la PKC muestran afinidades similares por calcio en ausencia de membranas y el proceso implica la intervención de la menos dos cationes según los estudios realizados mediante espectrocopía de fluorescencia. La presencia de membranas aumentó la afinidad por el catión. Además, los tres dominios interaccionan de manera distinta con las membranas en presencia de calcio. Según la calorimetría de titulación isotérmica, los dominios C2 de las isoenzimas clásicas de la PKC presentan dos tipos de sitios de unión de calcio, para enlazar un total de tres cationes de manera similar. La desnaturalización térmica de estos dominios C2 en presencia de distintas concentraciones de calcio fue irreversible. La transición se desplazó hacia mayores temperaturas con concentraciones crecientes de calcio, siendo mayor el efecto en presencia de fosfolípidos aniónicos. El significado de los ligandos unidos a cada uno de los dominios C2 fue diferente. La estructura secundaria de los dominios C2 de las isoenzimas clásicas de la PKC obtenida mediante espectroscopía de infrarrojo mostró una elevada proporción de hoja beta. La adición de calcio no modificó la estructura secundaria pero sí aumentó la estabilidad frente a la desnaturalización térmica. El proceso de desnaturalización de los dominios C2 fue distin