Purificación, disociación de subunidades e interacción con el anticuerpo AE-1 de la acetilcolinesterasa de suero fetal bovino. Ensayos con proteína quinasa A.

Laburpena

La acetilcolinesterasa (AChE) de suero fetal bovino (SFB) -una forma molecular tetramérica (molécula G4s; "s" de secreción)- se purificó unas 90.000 veces por cromatografía de afinidad en matriz de edrofonio agarosa. La enzima purificada se caracterizó, determinándose su coeficiente de sedimentación y su masa molecular. Se corroboró la naturaleza serín-esterasa de AChE por el marcado del centro activo con el organofosforado (3H)-Diisopropilfluorofosfato. Además, se comprobó que de los 5 sitios potenciales de N-glicosilación de la AChE de SFB, cuatro al menos están glicosilados. Se demostró que tanto las interacciones hidrofóbicas como los enlaces disulfuro intervienen en la asociación de las subunidades que componen los tetrámeros de AChE. La transformación de las formas G4s hidrofílicas en moléculas G2 y G1 anfifílicas sugirió que el carácter anfifílico de la subunidad de AChE deriva de alguna región polipeptídica hidrofóbica, y no de un glicolípido o un ácido graso unidos a la proteína. Se realizaron estudios estructurales, demostrándose que la subunidad de AChE posee una conformación muy flexible, que puede ser fundamental para generar la serie completa de formas moleculares. Particularmente interesante fue la identificación de un estado de "glóbulo fundido", que podría representar un intermedio común para distintas alternativas de plegamiento. Por otro lado, se estableció que el epítopo para el anticuerpo AE-1, generado contra la AChE de eritrocito humano, consiste en un dominio conformacional de la enzima. En el caso de la AChE de otros orígenes distintos del eritrocito humano, se formarían inmunocomplejos estables a través de la unión del AE-1 con dos subunidades del mismo oligómero de AChE, lo que explicaría la ausencia de interacción entre el anticuerpo y los monómeros de la enzima de SFB, cerebro humano y músculo esquelético de conejo. Finalmente, se comprobó que l