Distrofia muscular por deficiencia de merosinaexpresión de formas activas e inactivas de ecto-5'-nucleotidasa en tejidos de ratones normales y distróficos lama2dy

Abstract

1. Introducción La distrofia muscular congénita (CMD) es una enfermedad muy grave que afecta principalmente al músculo esquelético. Es el resultado de mutaciones en el gen de la cadena alfa-2 (o merosina) de la laminina muscular (laminina-2), que conecta la lámina basal con el complejo glicoproteico del sarcolema. Los ratones Lama2dy muestran fenotipo distrófico por defectos en el gen de la merosina, de modo que presentan una degeneración muscular muy semejante a la de los pacientes con CMD, y por ello se emplean para estudiar las anomalías fisiopatológicas asociadas al síndrome distrófico. La ecto-5'-nucleotidasa (eNT, EC 3.1.3.5) es la última enzima de la cascada que cataliza la hidrólisis de los nucleótidos de adenina del medio extracelular en adenosina. Está anclada a la cara externa de la membrana plasmática por un resto de glicosilfosfatidilinositol. También se ha descrito la existencia de una forma soluble, extracelular, derivada de la de membrana. eNT se encuentra en los tejidos en forma de dímeros, con las subunidades unidas por enlaces no covalentes. Es una glicoproteína y la secuencia de nucleótidos del cDNA sugiere la presencia de cuatro sitios de N-glicosilación. Los trabajos realizados por el grupo del Dr. Vidal con músculo de ratones control (MN) y distróficos Lama2dy (MD) revelaron un aumento importante (3-4 veces) de la actividad enzimática de eNT en MD, pero no se hallaron diferencias en los parámetros cinéticos ni en los análisis de sedimentación con eNT de MN y MD. Además, se observaron dos tipos de moléculas de eNT: las catalíticamente activas y las inactivas, y un aumento en la proporción de moléculas activas en el músculo de ratón distrófico. 2. Resultados y Discusión La extracción sucesiva del hígado, riñón, corazón y pulmón de ratón con tampón Hepes, Hepes + Triton X-100 y Hepes + Triton X-100 + desoxicolato sódico, permite obtener preparaciones ricas en activ