Validación analítica y aplicación práctica de métodos para la determinación de proteínas de fase aguda en el ganado porcino

Resum

En el presente trabajo se realizaron tres experiencias con el fin de: (1) analizar y estudiar los métodos comerciales existentes hasta la fecha para las determinaciones de las proteínas de fase aguda (PFAs) en muestras de la especie porcina, y (2) evaluar la utilidad de dichas determinaciones en su aplicación como herramienta en el trabajo veterinario a nivel de campo como marcador precoz de enfermedades y procesos subclínicos. En la primera experiencia se validaron los métodos comerciales disponibles actualmente para determinar la haptoglobina (Hp), proteína C reactiva (CRP), amiloide A sérico (SAA) y Pig-MAP en la especie porcina. Los coeficientes de variación (CVs) fueron menores del 20% en todos los casos, con la excepción de los coeficientes de variación inter-ensayos para la CRP y para el Pig-MAP en muestras con baja concentración de estas proteínas; y en el ensayo para la determinación del SAA en concentraciones altas y bajas. Todos los métodos mostraron una buena linealidad y límite de detección, siendo lo suficientemente bajos como para detectar PFAs en animales sanos. Los valores de Hp y SAA se vieron afectados por la influencia de la hemólisis. La lipemia afectó principalmente a la determinación del SAA. Tras la aplicación de una dosis subcutánea de esencia de trementina para inducir de forma artificial un proceso inflamatorio, se observó un incremento de 15 veces por encima de sus niveles iniciales en las concentraciones de la CRP y del SAA , mientras que los niveles de Hp y Pig-MAP aumentaron algo menos de 5 veces. En la segunda experiencia, se midieron cinco proteínas de fase agudas (PFAs) (Hp, CRP, SAA, Pig-MAP y albúmina) en cerdos infectados de forma natural por el virus de síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV), el virus de enfermedad de Aujeszky (ADV), circovirus porcino tipo 2 (PCV2) y Mycoplasma hyopneumoniae, y en animales con mordeduras en cola y orejas, artritis y otros procesos inflamatorios agudos. Como control se usaron cerdos sanos libres de patógenos específicos (SPF). En cerdos infectados con el virus del PRRS, todas las PFAs, a excepción del Pig-MAP sufrieron cambios significativos comparados con los animales control. En animales infectados con el ADV sólo la Hp presentó cambios de importancia estadística, mientras que los cerdos infectados con PCV2 mostraron modificaciones marcadas en todas las PFAs analizadas. Los animales afectados con micoplasmosis mostraron unos niveles en todas las PFAs analizadas considerablemente superiores a los niveles presentados en animales SPF. Finalmente, todas las PFAs estudiadas mostraron cambios sustanciales en cerdos que sufrían un proceso inflamatorio agudo. Los resultados indicaron que en las diferentes enfermedades estudiadas se desarrolló una respuesta de fase aguda, siendo más marcada en animales con signos clínicos y con procesos bacterianos. La Hp sería la PFA que mejor refleja los estados patológicos; sin embargo, para conseguir una información más completa y valiosa sería aconsejable realizar perfiles de PFAs incluyendo otras proteínas, como la CRP o el SAA. En la tercera experiencia, se monitorizó una determinada patología en el ganado porcino: el Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRS), a lo largo de la evolución de ésta, en condiciones de campo, frente a un grupo de animales control (SPF) que no padecieron la enfermedad. Se realizó un seroperfil para conocer exactamente la dinámica en la producción de anticuerpos, y RT-PCR en todas las muestras para poder determinar el momento en el que se produjo el contacto real con el virus y la viremia. Frente a esta evolución de los anticuerpos se comparó la evolución en los niveles séricos de dos proteínas de fase aguda, la Hp y la CRP. Los animales que cursaron PRRS, desarrollaron un perfil serológico de anticuerpos y viremia típicos de la patología, mientras que los niveles de Hp y CRP se alteraron de forma precoz a la producción de anticuerpos, y coincidiendo con el incio de la viremia en los animales.