Identificación de una nueva tiorredoxina mitocondrial y nuclear en hojas de pisum sativum l.caracterización de sus dianas mitocondriales y su respuesta frente al estrés salino

Abstract

RESUMEN Las plantas contienen varios genes que codifican tiorredoxinas (Trxs), proteínas de bajo peso molecular implicadas en la regulación de la actividad de diversas enzimas a través del intercambio ditiol-disulfuro. Además de las Trxs cloroplastídicas y citosólicas, las mitocondrias de plantas contienen una tiorredoxina reductasa dependiente de NADPH (NTR) y una Trx o específica, y hasta la fecha no se ha descrito ningún gen que codifique una Trx nuclear. En esta Tesis Doctoral se describe por vez primera, la presencia en mitocondrias y núcleo de guisante (Pisum sativum L.) de una Trx o (PsTrxo1) caracterizada por la ausencia de intrones en su secuencia genómica, característica ésta atípica entre las Trxs. Mediante análisis western blot a partir de mitocondrias y núcleos purificados de hojas de guisante, inmunolocalización y estudios de expresión transitoria de la proteína fusionada a GFP, se ha demostrado la colocalización de PsTrxo1 en ambos compartimentos celulares. Más aún, la identificación por MS/MS de la Trx mitocondrial nativa empleando mitocondrias altamente purificadas y técnicas de FPLC, así como ensayos in vitro de importación a mitocondrias aisladas, han corroborado la localización mitocondrial de esta proteína. La proteína recombinante PsTrxo1 se ha demostrado que posee actividad Trx, reduciéndose de forma más efectiva por la NTR mitocondrial de Saccharomyces cerevesiae (Trr2) que por la citosólica de trigo, constituyendo así in vivo parte de un sistema NTR/Trx similar al descrito e