Estudio ontogénico del páncreas endocrino de dorada (Sparus aurata L.)

Resumen

OBJETIVOS Realizar un estudio sistemático completo sobre la ontogénesis de los distintos tipos de células endocrinas pancreáticas y su organización, aplicando técnicas de microscopía óptica y electrónica convencional e inmunocitoquímicas en la dorada, Sparus aurata L. METODOLOGÍA Se han estudiado 150 ejemplares de S. aurata, con edades comprendidas entre la eclosión y 114 días después de la eclosión procedentes del Centro Oceanográfico de Murcia (IEO). Las muestras se procesaron para su estudio con técnicas para microscopía óptica y electrónica convencional y las técnicas inmunocitoquímicas peroxidasa-antiperoxidasa (PAP), doble fluorescencia con rodamina y fluoresceína e inmunoglobulina-oro (IgG-oro). Los antisueros utilizados han sido obtenidos contra insulina de bonito (INS), somatostatina-25 de salmón (SS-25), somatostatina-14 sintética (SS-14), somatostatina-28 (1-12) (SS-28), glucagón porcino (GLU), péptido similar al glucagón-1 (GLP-1), péptido similar al glucagón-2 (GLP-2), péptido tirosina-tirosina (PYY) y neuropéptido tirosina (NPY). La especificidad de las inmunorreacciones se determinó realizando pruebas de preabsorción. CONCLUSIONES Durante la ontogénesis las células endocrinas pancreáticas se organizan en un "cordón primordial" en la eclosión; "islote primordial" con un día; "islote único" a partir de 2 días hasta 24 donde se forma un "islote grande", uno "pequeño" y "células aisladas" y "agrupadas"; a partir de 51 días se forma un "islote principal" e "islotes intermedios y pequeños". Las primeras células que aparecen son aquellas donde inmunorreactividad a INS y SS-25 coexisten (cordón e islote primordial), presentando dos tipos de gránulos de secreción que se marcan con anti-INS y anti-SS-25. Las células con SS-14 y SS-28 tienen características ultraestructurales semejantes. Las pruebas de preabsorción determinan que el antisuero GLP-1 no es específico. En las últimas etapas estudiadas se encuentran células con GLU y con GLU coexistiendo con péptidos similares al NPY. Se demuestra coexistencia de INS y diferentes somatostatinas en células aisladas y agrupadas próximas al conducto pancreático. Fibras nerviosas con inmunorreactividad semejante a PYY se demuestran de 17 días en adelante. Cada inmunorreactividad a un péptido aparece desde la eclosión en adelante según un modelo establecido. La disposición de las células endocrinas en los islotes se mantiene a lo largo de todo el desarrollo, localizándose INS, SS-14 y SS-28 (1-12) en la zona interna, SS-25, GLU y NPY en la periferia. El número de gránulos de secreción y su tamaño aumentan conforme progresa la ontogenia siendo la población de gránulos de secreción heterogéneo respecto a su ultraestructura. En las primeras etapas ontogénicas, las cisternas de retículo endoplasmático rugoso están aisladas o asociadas longitudinalmente en todos los tipos celulares endocrinos. Posteriormente, aparecen apiladas. Todas las células presentan organelas correspondientes a vías de secreción regulada. En las primeras etapas de la ontogénesis se encuentran células endocrinas en mitosis y en las últimas es frecuente encontrar células involutivas. En el transcurso de la ontogenia aparecen nuevos islotes y células endocrinas en relación con los conductos pancreáticos. Se sugiere un doble origen celular, las células con INS y somatostatina procederían del intestino indiferenciado y las de GLU y péptidos similares al NPY de los conductos pancreáticos. Existe relación entre desarrollo del aparato digestivo y la aparición de hormonas pancreáticas. OBJECTIVES To carry out a full systematic ontogenic study of different types of pancreatic endocrine cells and its organization, using conventional optical and electronic microscopy techniques and inmunocytochemical techniques of gilthead sea bream bream, Sparus aurata L. METHODOLOGY 150 specimens of S. aurata was studied, from hatching to 114 days of age after hatching from the Centro Oceanográfico of Murcia (IEO). The samples has been processed for conventional optical and electronic microscopy techniques and for inmunocytochemical techniques peroxidase-antiperoxidase (PAP), immuofluorescence double staining with tetramethylrhodamine isothiocyanate and fluorescein isothiocyanate and inmunogold. The antisera have been used was obtained against bonito insulin (INS), salmon somatostatin-25 (SS-25), synthetic somatostatin-14 (SS-14), somatostatin-28 (1-12) (SS-28), porcine glucagon (GLU), glucagon-like-peptide-1 (GLP-1), glucagon-like-peptide-2 (GLP-2), peptide tyrosine-tyrosine (PYY) and neuropeptide tyrosine (NPY). The specificity of the immunostaining was determined by preabsorption test. RESULTS During ontogenesis, pancreatic endocrine cells are arranged in a 'primordial cord" at hatching; "primordial islet" with a day; "single islet" from 2 to 24 days and later is formed a "big islet", one "small islet" and "isolated and cloustered cells"; from 51 days forms a "principal islet" and "intermediate and small islets". The first cells that appear coexist INS-ir and SS-25-ir (primordial cord and islet), featuring two types of endocrine granules marked with anti-INS and anti-SS-25. SS-28-ir and SS-14-ir cells have similar ultrastructural characteristics. Preabsorption tests determined that GLP-1 antiserum is not specific. In the last stages, are found GLU-ir cells and GLU coexisting with peptides of the NPY-ir family cells. Coexistence of INS and different somatostatins is shown in isolated and clustered cells close to pancreatic duct cells. Nerve fibers with similar PYY-ir is shown in 17 days of age from up. Each immunoreactivity to a peptide appears from hatching later according to an established model. The arrangement of endocrine cells in the islets is maintained throughout the development, locating INS, SS-14 and SS-28 (1-12) in the area closed, SS-25, GLU and NPY in the periphery. The number of granules of secretion and its size increase as progresses the ontogeny its being the population of secretion granules heterogeneous regarding its ultrastructure. In the early stages of development, cisterns of rough endoplasmic reticulum are isolated or associated longitudinally on all endocrine cell types. Later, they are stacked. All cells have regulated secretion pathways organelles. In the early stages of ontogenesis is found mitotic endocrine cells and the latest is common to find involutionary cells. In ontogeny are found new islets and endocrine cells in relation to the pancreatic ducts. A double cell origin, it is suggested with INS and somatostatin cells would come from undifferentiated bowel and GLU and peptides similar to the NPY of the pancreatic ducts. Relationship between development of the digestive system and the emergence of pancreatic hormones.