New insights in the study of boar semen cryopreservation

Resumen

El objetivo principal fue mejorar el conocimiento actual de la criopreservación espermática en porcino. Se propusieron tres objetivos concretos: (1) Determinar el papel de los antioxidantes del plasma seminal (PS) en la congelabilidad espermática (exp. 1); (2) evaluar si el PS de la fracción post-espermática es el único responsable de que los espermatozoides del eyaculado completo congelen peor que los de la fracción rica en espermatozoides (FR) (exp. 2); y (3) analizar si el tiempo de conservación en nitrógeno líquido (NL) de las dosis de semen congeladas influye en la calidad espermática a la descongelación (exp. 3). En el exp. 1, se utilizaron diez eyaculados recogidos manualmente en fracciones: los 10 primeros ml de la FR (P1), el resto de la FR (P2) y la post-FR. Los espermatozoides de una parte de cada fracción fueron criopreservados utilizando un protocolo estándar para pajuelas de 0,5 ml. El resto fue utilizado para recoger el PS. Los espermatozoides de P1 y P2 mostraron mejor motilidad y viabilidad que los de la post-FR (P<0,01) a la descongelación. Mientras que los espermatozoides viables de P1 y P2 generaron menos sustancias oxígenos reactivas y experimentaron menos peroxidación lipídica (LPO) que los de post-FR (P<0,01). El análisis de regresión indicó que la superóxido dismutasa (SOD), la capacidad antioxidante equivalente de Trolox (TEAC) y la de reducción férrica del plasma tenían un buen valor predictivo para la motilidad a la descongelación (R2 = 54,8 %, P < 0,001), y la SOD, paraoxonasa 1, glutatión peroxidasa 5 y TEAC para la viabilidad (R2 = 54,8 %, P < 0,001). Estos resultados demostraban claramente que los antioxidantes del PS están implicados en la congelabilidad de los espermatozoides de porcino. En el exp. 2, doce eyaculados fueron manualmente recogidos también en fracciones. Las muestras fueron centrifugadas para separar los espermatozoides del PS. Los espermatozoides de P1 y P2 fueron rediluidos bien un su propio PS o en PS de la post-FR, conservados a 17º durante 12-16 h y seguidamente congelados. La conservación en PS de la post-FR perjudicó (P<0,05) la motilidad, independientemente de si procedían de P1 o P2. El origen del semen perjudicó la viabilidad, independientemente del PS utilizado en la conservación (peor en P2 que en P1; P<0,05). A la descongelación, el PS no influyó, pero sí el origen de los espermatozoides; los de P1 mostraron mejor motilidad y menor LPO que los de P2 (P<0,05). El perfil proteico de los espermatozoides fue analizado con 2D-PAGE mostrando diferencias entre los de P1 y P2. Estos resultados evidencian que el PS de post-FR no es perjudicial para la congelabilidad de los espermatozoides de porcino y sugieren que el proteoma de los espermatozoides podría explicar las diferencias en congelabilidad espermática entre fracciones del eyaculado. En el exp. 3, la motilidad, incluidos los parámetros de cinética, y la viabilidad espermática pos-descongelación se evaluaron en 58 muestras conservadas en NL durante 8 años. Las valoraciones se realizaron a los 2, 4 y 8 años de conservación, y se compararon con las realizadas a los 15 d después de la congelación (control). La viabilidad no estuvo afectada por el tiempo de conservación, pero si la motilidad total y progresiva, que fueron menores (P<0,01) en las muestras conservadas 4 y 8 años. Los parámetros de cinética diferían entre los controles y las muestras conservadas 2 y 4 años (P<0,01). Estos resultados demuestran que conservar el semen congelado de porcino en nitrógeno líquido más de 2 años puede perjudicar la motilidad espermática a la descongelación.