Análisis estructural y funcional de la retina de ratón sometida a sección quirúrgica del nervio óptico. Efecto protector de proinsulina

Résumé

El trabajo de investigación de la presente Tesis Doctoral tiene como propósito el desarrollo de un modelo de neurodegeneración de células nerviosas en la retina de ratón, que sea válido para la evaluación de agentes neuroprotectores. Dicho modelo ha de ser validado cuantitativa y cualitativamente, lo que asegura su reproducibilidad, seguridad y eficiencia. Para el desarrollo del trabajo ha sido necesario poner a punto técnicas quirúrgicas, ideando una vía de acceso a cavidad orbitaria y al nervio óptico, sin producir compromiso vascular. Asimismo, se han utilizado técnicas de registro electrofisiológico de la respuesta de la retina a estímulos lumínicos (electrorretinograma). Los análisis cuantitativos estructurales han sido posibles gracias a la utilización de técnicas de recuento celular sobre secciones trasversales de retina, cuyas células habían sido previamente marcadas por técnica histoquímica. Los resultados obtenidos permiten describir un método quirúrgico de sección de nervio óptico en ratón mediante el cual es posible inducir la degeneración y muerte de las células ganglionares de la retina manteniendo indemne el aporte sanguíneo a la retina a través de sus vasos. Mediante el uso de dicho modelo, hemos demostrado que la sección de nervio óptico en ratón induce cambios en la respuesta umbral escotópica del electrorretinográficos estándar. Asimismo, la sección de nervio óptico en ratón induce una degeneración de células ganglionares de forma progresiva tras el procedimiento lesivo, evidenciable por técnicas de recuento celular. Se demuestra el paralelismo existente entre la disminución numérica de células ganglionares y las alteraciones electrorretinográficas observadas. Por tanto, queda validado el estudio electrorretinográfico para la realización del seguimiento de la degeneración de células ganglionares y el posible uso de la lesión de nervio óptico para el estudio de agentes neuroprotectores. El ensayo realizado por nosotros en la presente Tesis Doctoral ha permitido valorar, por lo menos preliminarmente, el posible efecto neuroprotector de la proinsulina sobre la degeneración de células ganglionares inducida por sección de nervio óptico. El modelo múrido de sobre-expresión de proinsulina puede servir de ejemplo para el desarrollo de nuevos modelos transgénicos que permitan la evaluación del efecto neuroprotector de nuevas moléculas o factores tróficos.