Efectos del tratamiento prolongado con pramipexol sobre el transportador de dopamina

Abstract

El transportador de dopamina (DAT) es una glicoproteína de membrana que se expresa en neuronas dopaminérgicas y es responsable del aclaramiento de dopamina (DA) del espacio extracelular. DAT es regulado por diferentes proteínas presinápticas, incluyendo los autorreceptores dopaminérgicos D2 (D2R) y D3 (D3R). La función de DAT se encuentra alterada en trastornos neurológicos y psiquiátricos como la enfermedad de Parkinson, la depresión y el trastorno por déficit de atención con hiperactividad, en cuyos tratamientos existe un uso creciente de ligandos de D3R. Sin embargo, la interacción entre D3R y DAT es poco conocida. Este trabajo se centra en el efecto y mecanismos de acción del tratamiento prolongado con el agonista dopaminérgico D3 preferente pramipexol en la actividad y expresión de DAT en el sistema mesoestriatal del ratón. Los resultados muestran que el tratamiento con pramipexol (0.1 mg/kg/d) durante 6 días, causa una caída de la captación de DA que es mediada por D3R e independiente de D2R. La reducción de la actividad DAT es debida a un descenso de la afinidad del transportador (aumento de la Km) y no a cambios cuantitativos en su expresión o en el número de sitios activos de captación (Vmax). El análisis de DAT en condiciones no-desnaturalizantes y tras tratamiento de entrecruzamiento (cross-linking), así como el uso de co-inmunoprecipitación, ensayos de ligación in situ por proximidad (PLA) y detección de oligómeros por ¿dot-blot¿, mostró que pramipexol induce: 1. Interacción física entre D3R y DAT, 2. Formación de complejos oligoméricos de DAT de 150-250 kDa en los que se acumula DAT en su forma homomérica interaccionando con D2R y ¿-sinucleína, y 3. Un aumento de la fosforilación y ubiquitinación de DAT. Al igual que la caída en la captación de DA, las modificaciones en las interacciones de DAT no se observaron en ratones D3R-/- y fueron inhibidas por co-tratamiento con el antogonista D3 NGB2904 en ratones C57BL/6J. Esto indica que tanto el descenso en la captación de DA como los cambios en la interacciones de DAT son D3R-dependientes. Los hallazgos sugieren que los receptores presinápticos D3, a través de la interacción DAT-D3R, pueden participar en el efecto neuroprotector y antidepresivo del pramipexol, al reducir la captación de dopamina.