Estudios de expresión génica en la muerte súbita cardíaca de origen isquémico en tejido miocárdico, sangre y líquido pericárdico

Résumé

El diagnóstico preciso de la muerte súbita cardíaca de origen isquémico sigue siendo un tema de gran interés forense por la dificultad existente en evidenciar después de la muerte la presencia de signos histológicos o bioquímicos en el tejido miocárdico o en fluidos biológicos (líquido pericárdico o sangre) indicativos de dicho sufrimiento. La dificultad puede ser incluso mayor si el tiempo de sobrevivencia es breve, no pudiéndose poner de manifiesto, los cambios patológicos consecutivos a la isquemia miocárdica. Por estos motivos, en las últimas décadas se han propuesto infinidad de métodos complementarios a la autopsia forense cardíaca que persiguen la detección más precoz y precisa de los cambios consecutivos a la isquemia miocárdica. En este sentido, el objetivo general de esta Tesis Doctoral, es mejorar el conocimiento sobre fisiología y fisiopatología de la isquemia miocárdica, en muertes cardíacas de origen isquémico y otras causas en las que la isquemia miocárdica no es la causa primaria de muerte, y además el de proponer nuevos métodos para el diagnóstico precoz de la lesión isquémica miocárdica, basados en la expresión génica de ciertos marcadores moleculares de sufrimiento isquémico, inflamación y revascularización. Usando técnicas de estudio de la expresión génica, como es la PCR cuantitativa en tiempo real, y una vez analizada y comprobada la cantidad, calidad e integridad del ARN mensajero (ARNm) obtenido en tres tipos de muestras: tejido miocárdico, sangre y líquido pericárdico, se han estudiado los perfiles de expresión de cinco moléculas, dos proteínas estructurales del corazón, la troponina I cardíaca (TNNI3) y la cadena ligera de la miosina (MYL3), y tres proteínas implicadas en la inflamación y neoangiogenesis la metaloproteinasa de matriz 9 (MMP9), el factor de crecimiento transformante beta 1 (TGFB1), y el factor de crecimiento del endotelio vascular A (VEGFA). Además, junto con el estudio de expresión génica, se ha estudiado, tanto en sangre como en líquido pericárdico, un novedoso marcador bioquímico usado recientemente en la práctica clínica habitual para el diagnóstico del infarto agudo de miocardio (IAM), la troponina T cardiaca ultrasensible (cTnThs), considerando su propuesta como marcador diagnóstico de lesión isquémica postmortem. Del presente trabajo de investigación se concluye que se puede obtener ARNm, en muestras postmortem de tejido miocárdico, sangre y líquido pericárdico en cantidad, y con una calidad e integridad suficiente y adecuadas para la realización de estudios expresión génica. Además se ha encontrado que el estudio y conocimiento del perfil bioquímico en sangre y líquido pericárdico de cTnThs, y del perfil de expresión molecular, en estos dos fluidos y en tejido miocárdico, de las cinco moléculas consideradas, nos ha permitido, en primer lugar mejorar el conocimiento de la fisiopatología de la patología isquémica miocárdica y en segundo lugar aporta al patólogo forense una información complementaria fundamental para establecer el diagnóstico de muerte súbita cardíaca de origen isquémico, sobre todo en aquellos casos en los que la muerte se produce muy cercana al inicio de los síntomas. Por tanto el estudio de la cTnThs y de determinados perfiles de expresión constituyen un nuevo método de diagnóstico postmortem de la lesión miocárdica isquémica, permitiéndonos incluso establecer la extensión, intensidad y localización de la necrosis miocárdica. A continuación se incluyen las referencias bibliográficas de mayor relevancia en relación al trabajo de investigación desarrollado: Gonzalez-Herrera L, Valenzuela A, Marchal JA, Lorente JA, Villanueva E (2013) Studies on RNA integrity and gene expression in human myocardial tissue, pericardial fluid and blood, and its postmortem stability. Forensic Science International 232:218¿228 Dabek J, Mazurek U, Gasior Z, Wilczok T, Kulach A, Kucia-Kuzma S (2006) Transcriptional activity of genes encoding Transforming Growth Factor beta and its receptors in peripheral blood mononuclear cells from patients with acute coronary syndromes. Int J Cardiol 111:275-279 Eggers KM, Venge P, Lindahl B (2012) High-sensitive cardiac troponin T outperforms novel diagnostic biomarkers in patients with acute chest pain. Clin Chim Acta 413:1135-1140 Fordyce SL, Kampmann ML, van Doorn NL, Gilbert MT (2013) Long-term RNA persistence in postmortem contexts. 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