Efecto del tratamiento de los espermatozoides sobre la fecundación in vitro en el caprino

Abstract

El principal objectiu del treball de recerca d'aquesta tesi fou l'estudi de l'efecte del tractament dels espermatozoides caprins frescs sobre diferents paràmetres seminals i la seva relació amb els resultats de fecundació in vitro (FIV) d'oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro.Per tal d'assolir aquest objectiu, es varen fixar els següents objectius concrets: 1) Estudiar l'efecte de diferents sistemes de rentat i selecció dels espermatozoides (swim-up, gradient discontinu de Percoll, rentat per centrifugació i centrifugació mitjançant una solució de Ficoll) sobre els resultats de FIV, 2) Estudiar l'efecte de la inducció in vitro de la capacitació espermàtica mitjançant diferents concentracions (5, 50 i 100 μg/mL) i temps de preincubació (1, 15, 30, 45 i 60 min) amb heparina, 3) Determinar la concentració òptima d'espermatozoides en el medi de fecundació, 4) Valorar la incidència de reacció acrosòmica espontània i la seva relació amb la taxa de penetració dels oòcits de cabra i la seva divisió embrionària i 5) Analitzar l'evolució de la motilitat, viabilitat i integritat de l'acrosoma dels espermatozoides durant las diferents fases de la FIV i la seva relació amb els resultats de fecundació. Els anàlisis seminals realitzats en aquest treball van consistir en l'anàlisi subjectiu de la motilitat individual dels espermatozoides, la viabilitat d'aquests mitjançant la tinció d'eosina-nigrosina, la incidència de reacció acrosòmica verdadera mitjançant la Triple Tinció i la integritat de l'acrosoma mitjançant l'ús de la lectina Pisum Sativum marcada amb fluoresceïna durant tot el procés de la FIV.Els resultats obtinguts permeteren concloure que en les nostres condicions: 1) No és necessari la realització de tècniques de rentat i selecció dels espermatozoides frescs procedents de bocs de provada fertilitat per a l'obtenció d'embrions a partir de oòcits madurats i fecundats in vitro. 2) La utilització d'heparina per a induir la capacitació espermàtica incrementa significativament els resultats de FIV, obtenint els millors resultats de divisió embrionària amb concentracions altes d'heparina (50 i 100 µg/mL) en el medi de pre-incubació dels espermatozoides, no observant diferències significatives en els resultats de FIV antre els diferents temps de pre-incubació. 3) Una concentració de 4x106 de espermatozoides viables/mL a les gotes de FIV proporciona els millors resultats de divisió embrionaria. 4) La incidència de la reacció acrosòmica espontània no està relacionada con la taxa de penetració, encara que es veu afavorida per la presencia dels complexes cumulus-oòcit, observant un increment en el nombre d'espermatozoides vius que pateixen dita reacció entre las 8-12 hores de co-cultiu de les gàmetes i 5) Els paràmetres seminals avaluats (motilitat, viabilitat i integritat de l'acrosoma) durant el procés de preparació dels espermatozoides frescs de boc no influeixen sobre els resultats de FIV de oòcits de cabres prepúbers madurats in vitro.